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鸟苷酸的生产方法有酶水解ＲＮＡ法、菌体自溶法、发酵法和化学合成法４种方法。鸟苷酸生产工艺目前运用最广泛的是发酵转化法，利用一定微生物，以葡萄糖作为碳源生产鸟苷，再利用生物或化学方法将其转化为鸟苷酸，如鸟苷磷酸化得鸟苷酸，且工业化生产鸟苷酸的方法就是采用鸟苷发酵的二步生产法。

菌体自溶法

当微生物遇到对生长不利的条件时，微生物就会利用微生物细胞中本身具有的各种RNA分解酶，启动核糖体自溶系统，使RNA自溶，以获得足够维持生存的能量。菌体自溶法是在一定条件下由细菌自溶降解其自身的核糖核酸，从而获得核苷酸的方法。因为效率太低，而且提取困难，菌体自溶法目前基本不用。

酶水解RNA法

酶水解RNA法是以酵母或白地霉细胞等为原料，利用磷酸二酯酶水解核糖核酸来制备鸟苷酸的方法,主要包括从菌体中提取RNA、5'-磷酸二酯酶制备、RNA的酶解和单核酸的分离、纯化。此方法起源于20世纪60年代初，日本的国中明发现了利用橘青霉（Penicilliumcitrinum）提取的5'-磷酸二酯酶可以降解RNA生成5'-核苷酸。Chemicalbook酶水解RNA法关键酶是青霉菌5'-磷酸二酯酶，由于副产品较多，此方法目前也不常用。5'-磷酸二酯酶以桔青酶或金色链霉菌为出发菌种，通过液体深层发酵法获得，其工艺流程如下：斜面菌种培养→种子培养→发酵培养→滤液。

化学合成法

化学合成法通常是用焦磷酸或者磷酸的活性衍生物对核苷进行磷酸→酯化反应的方法。因为需要大量有机溶剂,存在环境污染及原料来源等问题，化学合成法在生产中也极少使用。

发酵法

发酵法生产鸟苷酸可分为2种方法：直接发酵法和发酵转化法。直接发酵法利用一定数量微生物，以葡萄糖为碳源进行发酵得到鸟苷酸，但此方法得到的鸟苷酸产量低，不能达到工业化要求。目前，运用最广泛的方法是发酵转化法，利用一定微生物，以多糖或葡萄糖作为碳源生产鸟苷，再利用生物或化学方法将其转化为鸟苷酸。一般都是先对枯草芽孢杆菌进行斜面培养、种子培养以及发酵培养获得鸟苷，再利用溶液与吡啶溶液制得鸟苷酸，反应式如图所示。

目前，我国鸟苷酸发酵得率较国外先进水平低，鸟苷酸工业化生产还未成熟，如何提高鸟苷酸产量成为研究的重中之重。